【前言简介】
1973年发现了一组具有高电泳迁移率的非组蛋白核蛋白，称为高迁移率组(HMG9蛋白）。高迁移率组蛋白1(HMGB1)普遍存在的小蛋白(30kDa)，是非组蛋白核蛋白组的主要成分。该蛋白在真核生物中广泛表达，因此在亚细胞定位的中发挥了大量不同的功能。HMGB1易于在细胞核和细胞质]之间穿梭，并在各种组织中广泛表达。在细胞核内，HMGB1参与DNA结合和折叠活性，以及各种关键DNA过程（重组、修复、转录、基因表达和基因组稳定性）的调节因子。然而，HMGB1一旦被免疫活性细胞释放到细胞质中，就参与了疾病的发病机制和炎症反应(损伤相关分子模式(DAMP。它也作为坏死标志物，参与免疫反应过程（肝衰竭、类风湿关节炎、急性肺损伤）和弥散性血管内凝血，并在药物性肝衰竭的情况下测量。在药物性肝损伤(Dili)的病例中，HMGB1具有显著的临床价值。Dili是急性肝功能衰竭的首要原因，是指由药物或化学药物如对乙酰氨基酚过量引起的肝损伤。根据IMISAFE-T联盟与DILIN和PSTC合作评估了新的肝脏安全生物标志物，包括HMGB1(除了骨桥蛋白、角蛋白18和MCSFR1，miR-122和GLDH)作为i)从肝细胞损伤到严重Dili和ii进展预测的标志物。预测疑似内在肝损伤的发生(EASL临床实践指南)。
【检测原理】
HMGB1检测试剂盒是一种用于定量检测血清和血浆中HMGB1的夹心治酶免疫分析法。在微孔板的孔上包被纯化的抗HMGB1抗体。样品中的HMGB1与固定化抗体特异性结合，并被第二种酶标记的抗体识别。底物反应后，HMGB1的浓度由颜色深浅成正比。
【试剂盒组成成分】
1) 微孔板： 12x8，96孔
2) 酶联物： 1x12ml，即用型
3) 标准品： 1x3ml
4) 质控品： 1x3ml
5) 酶联物稀释液： 1x12ml，即用型
6) 稀释缓冲液： 1x100ml，即用型
7) 洗涤缓冲液: 5倍浓缩液，2x100ml
8) 底物液A: 1x6ml，即用型
9) 底物液B: 1x6ml，即用型
10) 终止液：1x12ml，即用型
11) 封板纸：2条
【检测步骤】
1) 将100µL的预稀释标准品、对照和样品放入各自的微孔板中
2) 用封板纸覆盖，在37°C下孵育2小时
3) 弃去微孔中溶液，用洗涤缓冲液清洗底板5次。除去多余的溶液
4) 加入酶联物到每个孔中
5) 用封板纸覆盖，在25°C下孵育1小时
6) 弃去微孔中溶液，用400µL稀释的洗涤缓冲液清洗底板5次。除去多余的溶液
7) 加入100µL预混合底物液
8) 室温(18-25°C)在黑暗中孵育20 min
9) 加入100µL终止液液，终止酶促反应。通过轻轻地摇晃微孔板，简单地混合内容物
10) 在加入终止液后60 min内，用酶标仪在450nm(参考波长：600-650nm)处测量吸光度。
【结果计算】
1)得到的标准品的OD值(y轴，线性)与它们的浓度(x轴，对数)绘制在半对数图表纸上或使用自动方法。三次样条、4参数逻辑具有良好的拟合性。
2）对于标准曲线的计算，应用标准的每个信号（可能省略一个明显的重复离群值，可能使用更合理的单个值）
3）样品的浓度可以直接从标准曲线中读取。显示浓度高于最高标准的样品必须按照预检测设置说明中的描述进行稀释，并重新进行检测
4）如果是稀释的样品，该值必须乘以相应的稀释系数。
