预期用途
本Human GPIHBP1的进口试剂盒仅供科研用,不用于临床诊断。
此IBL试剂盒能用于人血清及EDTA-血浆中GPIHBP1的定量检测。
检测灵敏度0.99pg/ml,检测范围7.8 ~ 500 pg/mL
实验操作步骤
准备
1) 洗涤液的准备
Human GPIHBP1试剂盒的洗涤液是一种40倍浓缩液,应稀释为1X洗涤液进行洗板用。如用1950 mL稀释50 mL的浓缩洗涤液,制成2000mL即用稀释洗涤液。
2)酶标记抗体的准备
Human GPIHBP1试剂盒中的标记抗体是一种30倍浓缩物,根据所需量用标记抗体稀释液稀释。
示例:
如果你用一条板(8孔),就需800μL。的标记抗体。用870 μL的标记抗体稀释液稀释30 μL浓缩液,充分混匀。并每孔各加100 μL此步操作需要在加入酶标记物时进行
剩余的浓缩标记抗体液需密封瓶装,存于4°C
2) 标准品的准备
加0。5 mL的去离子水到瓶装标准品中充分溶解,制成1000pg/mL的标准品液,避免反复冻融。
3) 标准品的稀释
准备7支试管,并每支各加230 μL EIA缓冲液。
将1000pg/ml的标准品230ul加入到试管-1中混匀,制成500pg/ml的标准品,再取500pg/ml的标准品230ul到试管-2中混匀,制成250pg/ml的标准品,以此类推,做2倍倍比稀释,制成500—7。8pg/ml的标准品系列。
实验步骤
Human GPIHBP1 的试剂盒使用前,将所有试剂应平衡至室温,大约30min,充分混匀,确保试剂质量无改变,标准曲线和样品检测必须同时进行。
1) 确定空白孔,并加入100ulEIA缓冲液。
2) 确定样本孔和标准品孔,并将样本和标准品100ul分别加入相应的孔中。
3) 盖板,37℃孵育60min,作为第一次反应。
4) 洗板,倒去孔内反应液,按要求加入预先准备好的洗涤液(每孔不少于350ul),,再弃去废液。重复洗板4次。在吸水纸上拍干,去除残留液滴。
5) 准备标记抗体,并将每孔中加入100ul 准备好的标记抗体。
6) 盖板2-8℃孵育30min作为第二次反应。
7) 洗板,倒去孔内反应液,按要求加入预先准备好的洗涤液(每孔不少于350ul),,再弃去废液。重复洗板5次。在吸水纸上拍干,去除残留液滴。
8) 每孔加入100ul TMB溶液。
9) 黑暗中室温孵育30min。
10) 每孔加入100ul 终止液终止反应。
11) 读取Human GPIHBP1 实验的OD值时:将板底污物清除,并保证板孔内无气泡,以空白孔为对照进行标准品和样本的测量。测量在450nm处进行,Human GPIHBP1 酶免检测实验的参考波长600-650nm。