【OXA和NDM碳青霉烯酶简介】
鲍曼不动杆菌是一种重要的机会性和耐多药革兰氏阴性菌,在卫生机构中引起医院感染。如果不及时治疗,这种感染可能导致败血症和死亡。碳青霉烯水解氧西林酶(OXAs)是不动杆菌中最常见的碳青霉烯抗性决定簇。尤其是鲍曼不动杆菌,其中OXA-23是在这些分离株中观察到的最常见的抗碳青霉烯决定簇。OXA-40(=24)和OXA-58也经常遇到,最近出现了携带OXA和NDM的不动杆菌属,特别是因为携带NDM和OXA编码基因的可移动遗传元件。可移动的遗传元件(包括质粒)构成了这些抗性因子水平传播的库。因此,不仅在耐药物种中,而且在载体物种中检测这些耐药因素,对于控制医院的抗生素耐药性至关重要。
【OXA和NDM碳青霉烯酶检测原理】
本试剂盒是基于胶体金纳米颗粒膜技术的即用型检测试剂盒,可用于检测和鉴定在琼脂培养皿上生长的肠杆菌科或NFGNB菌落分离物中的碳青霉烯酶。
对硝酸纤维素膜致敏:
1)直接针对NDM碳青霉烯酶的一个单克隆抗体(NDM线)
2)直接针对OXA-23碳青霉烯酶的一个单克隆抗体(O23线)
3)直接针对OXA-40和OXA-58碳青霉烯酶的一个单克隆抗体(O40/58线)
4)质控捕获试剂(顶部C线)
有不同的共轭物与胶体金颗粒结合并在膜上干燥:一种直接针对NDM碳青霉烯酶第二表位的共轭物、一种直接针对OXA-23碳青霉烯酶第二表位的共轭物、对OXA-40碳青霉烯酶特异的第三种共轭物、对OXA-58碳青霉稀酶特异的第五种共轭物和验证检测卡的质控共轭物。
当含有重悬细菌的缓冲液与膜接触时,溶解的共轭物通过被动扩散与样本迁移,共轭物和样本材料都接触到吸附在硝酸纤维素膜上的固定抗体。若样本中含有NDM、OXA-23、OXA-40或OXA-58碳青霉烯酶,则由共轭物及其特定靶标组成的各自复合物将分别与它们各自的特异线结合(NDM:NDM线;OXA-23:O23线;OXA-40/58:O40/58线)。通过被动扩散继续迁移,共轭物和样本材料都接触到质控线(顶部C线)并生成一条红线。15分钟内根据检测卡上的红色线条读取结果。
【样品收集及处理】
待测标本应采用标准的微生物学方法来获得和处理。
确保样品没有用含有甲醛或其衍生物的溶液进行处理。
【OXA和NDM碳青霉烯酶检测准备工作】
检测前,将试剂盒所有组分和样本(含有待测菌落的培养皿储存在4℃下)平衡至室温(15-30℃),打开检测卡包装袋并取出检测卡,立即进行检测,需标记患者名字或样本编号(一个样本以个检测卡)
样品准备:
已经为直肠拭子和血液培养物确定了有关除菌落以外的样本类型的性能声明。
对于直肠拭子和血培养,准备工作根据各自试剂盒中的说明书进行(S-1001:RESIST-BE;S-1002:ReSCape);对于细菌菌落,我们建议使用新鲜的菌落来获得最佳的测试性能。
1)准备一支收集管并加入6滴LY-E缓冲液
2)用一次性细菌接种环取1个菌落,并将细菌接种环浸入含有缓冲液的收集管底部,以收集细菌
3)在取出细菌接种环之前彻底搅拌混匀
4)封闭收集管并涡旋均质化
5)使用试剂盒提供的一次性移液管吸取100µL稀释后的样本并加入检测卡上的样本孔中(稀释后的样品体积必须达到移液管显示的黑线,才能准确地吸取100µL)
6)等待反应15分钟后读取结果
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