背景介绍：
莱姆病是一种经蜱传播的博氏疏螺旋体(由3个基因组组成)感染引起的多系统紊乱疾病。实验检测结果应与临床症状联系在一起。然而在疫区，实验检测可能会得到可疑的结果。尽管血液，关节液，脑脊髓液中培养疏螺旋体的方法均有文件记录，但这些培养的莱姆病的病原体对人体的感染能力却很低。对于基于血清检测其特异性抗体是公认有效的实验检测方案。
检测原理：
此IFA片孔内被包被有莱姆病的抗原——博氏疏螺旋体。用BPS缓冲液稀释血清样本或质控。置稀释液于反应孔中，在一定时间内与固相的抗原反应。洗片后去除未反应的血清蛋白。再加入荧光标记复合物与抗原-抗体复合物反应。进一步洗片后，移除未结合的荧光标记物。结果可通过标准荧光显微镜进行判定。阳性孔内可清晰的显示明亮的苹果绿荧光，与红色背景色形成对比。而阴性孔内则没有螺旋体荧光与阴性质控孔显色一致。阳性样本可进一步稀释重测来确定最大稀释度或终点稀释。
实验步骤
1. 用PBS洗涤缓冲液按1:64配制血清样本筛查稀释液(1个单位的血清样本+63个单位的PBS)。以前已检测为阳性的样本用PBS缓冲液从1:64开始配制倍比系列浓度稀释液。
2. 将阳性质控稀释至系列倍比浓度，包含其中一份高于最大稀释滴度，一份低于最大稀释滴度。(即1:4-1:16瓶装质控)
3. 各加10 µL血清样本，质控，稀释阳性质控(步骤2稀释的)于相应的各孔中。(每次实验都必须设阴性质控，阳性质控和系列阳性质控稀释液作为对照)
4. 置片于温度箱中，放入水浴锅或保温器中，在37± 0.5°C下孵育30分钟。
5. 用PBS洗涤液洗片3次，切勿让片静置晾干，直接进入下步骤。
6. 各加10μL复合物于各片孔中，重新置于湿度箱，在37+/-0.5℃下孵育30分钟。孵育时应避光，保护光敏的复合物。
7. 按步骤5重复洗片。然后加2-3滴封固剂于各片中并盖上盖玻片。
8. 在400倍的放大倍数下的荧光显微镜观察染色片。玻片在2-8℃下避光可保存24小时。
质控说明
每次检测都要设阴性质控对照和系列稀释阳性质控对照。阳性对照应该在1:256至1:1024之间有最大稀释滴度(终点稀释)。1:512稀释度样本的荧光强度可以作为临界(Cutoff)进行判读。如果对照品的显色情况与上述描述不符，检测结果应视为无效。应该重新检查试剂组分和操作步骤并重新检测样本。
阴性质控孔的状态反应的是相对应阴性的荧光显色情况，如果它与阳性质控孔内的显色相同或相近，可能是技术操作上出现错误，实验也应重测。
