【前言简介】
査菲埃立克次体以及人粒细胞无形体都是通过蜱传播的人类病原体。试剂盒使用了半纯化的原质小体以及桑椹胚(来自于细胞培养)。为了得到最好的粘附力以及背景参照,抗原分布在细胞基质中。
【检测原理】
将疑有査菲埃立克次体病人血清样品先预处理以除去类风湿因子,然后使用缓冲液稀释后加入到单独的孔中进行温育,使血清中的抗体与孔中抗原相结合。洗涤一次以洗去未反应的血清蛋白,然后加入荧光标记的抗人IgM抗体。再次洗涤洗去未结合的标记物。之后通过荧光显微镜进行观察。阳性结果可以观察到边界清晰的苹果绿荧光显色的包含物(桑椹胚)以及小的球菌在红色的细胞基质背景中。从左向右观察,左边的抗原是人粒细胞无形体,右边的是査菲埃立克体。阳性结果随后继续检测以得出最高的滴度。
【样本要求】
允许全血样品凝集,通过离心分离出血清样本。2-8℃下可保存5天,要保存更长时间需储存在-20℃环境下。严重的病人应该从疾病开始就采集样品,康复期的样本应该间隔2~4周采集以观察滴度变化。
【检测方法】
1. 将疑有査菲埃立克次体病人样本用样本稀释液进行预处理,在试管中混匀后放置5分钟,然后离心以除去聚合物。取上清液与PBS洗涤液混匀制筛查样。
2. 按需要稀释阳性质控。(注:所提供的阳性质控已经稀释过)
3. 对应孔中加入稀释好的病人样品,阴性质控以及稀释好的阳性质控。
4. 将玻片放入湿盒中,37℃下温育。
5. 将玻片取出,使用洗涤剂洗涤,不要让孔中变干。
6. 每孔加入荧光标记物,放回到湿盒中,37℃下避光温育。
7. 重复步骤5。
8. 玻片上滴加封固剂,盖上盖玻片。
9. 用显微镜在400× 视野下,观察玻片。
仅供科研使用。