【前言简介】
第三代头孢菌素（3GCs）是β-内酰胺类抗生素，经常用于医院环境中严重肠杆菌科感染的一线治疗。然而，由于耐药细菌中出现了水解酶的使用，包括超广谱β-内酰胺酶（ESBL）、高生产的头孢菌素酶、金属β-内酰胺酶（MBL）或碳青霉烯酶。这些耐药肠杆菌科是一个主要的公共卫生问题。它们的快速诊断和早期检测是实验室面临的日常挑战。表型测试（抗生素图）来确认这些耐药细菌的存在已经使用，但24到48小时才得到结果。比色生化测试也可用，但他们的解释仍然是主观的。最后，基于扩增目标DNA序列的检测抗性基因的分子测试，不能识别新的变异。本试剂盒检测是一种早期诊断工具，可检测细菌菌落或阳性血液培养上存在的3GC水解，允许实验室快速获得选择性概率抗生素治疗的适应症。本试剂盒是一种即用型的和易于使用的测试，具有一次性电极和相关读取器，可提供自动、数字和客观读数。
【检测原理】
头孢菌素酶试剂盒基于电活性基质的使用，类似于3GC，其酶水解释放能够产生通过伏安法测量的阳极氧化电流的产物。这种电流的强度可以使用电极和为此配置的专用读取器来测量。在本试验中，测量强度大于阈值的电流反映了3个GCs的细菌水解活性，导致细菌对这些抗生素的敏感性降低。本试验中使用的底物不被青霉素酶或不水解3GCs的氧西林酶水解。此外，诱导的AmpC对底物的水解将取决于AmpC头孢菌素酶的诱导性和/或去抑制水平。如果AmpC被高水平诱导或高度抑制，则底物将被水解并导致检测阳性（这主要见于阴沟肠杆菌、产气梭菌、弗氏梭菌和蜂房哈夫尼菌）。建议进一步证实其他耐药性机制，以补充临床诊断。
【样本】
检测头孢菌素水解酶样本必须根据常规的细菌学培养法获得，必须使用新鲜生长的细菌材料作为样本进行检测
本试验与水解酪蛋白琼脂、UriSelect-4培养基、ChromID ESBL培养基、马血琼脂型固体培养基以及Becton Dickinson® 和 BioMerieux血培养瓶相兼容。
【准备工作】
准备35-37℃培养箱
RED传感器为即用型，根据试验所需数量取出（一个传感器检测一份样本），注意边缘和角落，防止小切口，孵育反应混合物期间将其平衡至室温
BL-试剂、BLC缓冲液和TPTA缓冲液均为即用型
不要将BL-试剂平衡至室温，它从冰箱取出后必须立即使用并放回4℃环境中，不要涡旋。
步骤
1.反应混合物准备：
根据细菌培养的类型进行：
A.对于阳性血培养基（BC）：
1）取一支1.5mL微管，加入1500µL阳性BC和40µL BCL缓冲液（BCL），混合均匀
2）2000xg离心2分钟，弃去上清
3）加入1000µL等渗盐溶液（SAL）重悬颗粒
4）2000xg离心2分钟，弃去上清
5）加入40µL BL试剂（BL）重悬颗粒，再加入40µL TPTZ缓冲液（TPTZ）使最终体积为80µL
6）用移液器抽吸至均质化，并直接进行孵育
B.对于固体培养基（AGAR）：
1）取1支1.5mL微管，加入30µL BL试剂（BL）和60µL TPTZ缓冲液（TPTZ）使最终体积为90µL
2）用1µL细菌接种环取菌落进行检测，选择具有相似形态的菌落
3）将该样本加入BL-TPTZ混合物中，确保所有收集的菌落都释放到该反应混合物中，并直接进行孵育
2.孵育
将上述制备的反应混合物放入在35-37℃培养箱中孵育10分钟，然后直接进行检测
更多头孢菌素水解酶检测产品信息，请垂询400热线，咨询客服人员，我们将真诚为您服务！
