【前言简介】
甲肝是一种自限性疾病,很少出现慢性阶段或者并发症。这种疾病的感染通常出现在卫生条件、居住条件差的区域内。由于疾病是通过粪口途径进行传播的,因此在人口稠密的地区,单一的传染源就可以造成大的爆发。甲肝是由甲型肝炎病毒(HAV)所引起的,这种病毒是不具有囊膜的正链RNA病毒,带有一条线性单链的基因组,只能编码出一种已知的血清型。HAV带有4个主要的结构多肽,它特异性的集中于人类肝细胞的细胞质中。甲肝病毒感染会引起强烈的抗体反应,出现症状几天后就能检测到体内的IgG和IgM抗体。HAV IgG检测是一种重要的生物指标,可用于确定感染的阶段,分类病毒以及鉴别感染的来源。
【甲肝IgG试剂盒检测原理】
该酶联免疫检测试剂盒是基于竞争法原理。样品中的甲肝 IgG抗体与HRP标记的单克隆甲肝 IgG抗体竞争与微孔中包被的HAV重组抗原相结合。洗板洗去未结合部分,加入显色剂孵育后产生颜色,之后加入硫酸终止反应。颜色的深度与样品中甲肝抗体含量成正比。
【甲肝IgG试剂盒检测方法】
检测开始前,将试剂盒平衡到室温(18-30℃)。蒸馏水1:30对浓缩洗涤液进行稀释。
1. 分别加入100μl/孔已稀释样品、阴性质控、阳性质控。
2. 盖板37℃反应45分钟。
3. 300μl/孔洗涤液洗涤5次,拍干。
4. 加入50μl/孔酶联物
5. 37℃反应30分钟
6. 300μl/孔洗涤液洗涤5次,拍干。
7. 加入100μl/孔TMB底物溶液,室温孵育10分钟。
8. 加入50μl/孔终止液
9. 吸光度检测:在450nm处酶标仪读数(加终止液终止反应后5分钟内)
【结果计算】
质控范围
在450nm处,阳性质控的平均OD值-阴性质控的平均OD值应>0.300。
如果没有,则结果无效,需重复。
临界值(Cut off Value)计算
临界值=0.1+阴性质控的平均OD值
如果阴性质控的平均OD值<0.050,则临界值=0.100+0.050=0.150
结果说明
阴性结果:样品OD/临界OD<临界OD ,说明没有检测到甲型肝炎病毒IgG抗体
阳性结果:样品OD/临界OD≥临界OD ,说明患者可能感染过甲型肝炎病毒。