【前言简介】
脊髓灰质炎是一种由肠道病毒引起的传染病,它广泛流行于世界各地,并常常导致病人瘫痪和死亡。人类目前知道的人致病性脊髓灰质炎有三种类型:
1类(Brunhilde):通常会产生严重的症状。
2类(Lansing):出现稍微温和的症状。
3类(Leon):少,但伴随严重症状。
脊髓灰质炎病毒主要增生扩展在肠道的淋巴节内,并通过粪便排泄出去。咽喉也可能会感染脊髓灰质炎病毒,之后病毒就会遗留在人体口腔内。人感染脊髓灰质炎后,病毒就可以通过单核细胞分布到其它淋巴节,之后在淋巴节繁殖成各种脊髓灰质炎病毒。在第二个病毒血症阶段,病毒就停留在所有的器官和中枢神经系统的其它器官中。在90%以上感染了脊髓灰质炎的病人都不会出现任何主观症状,而其它剩余的病例中会出现:伴随低烧的非特异性疾病、头痛和喉咙发炎、痢疾、恶心和呕吐。伴随有肌肉疼痛和大脑神经的经典麻痹症非常少见。再次康复阶段要持续两年,而且常常会出现持久的破坏。脊髓灰质炎目前还没有治疗方法,仅有阿司匹林和适当的运动对症治疗会有些效果。在亚洲地区的很多国家中,脊髓灰质炎仍然是地方性的,但WHO已开始了巨大的工程来根除此疾病。在欧洲会有因旅游者带进的脊髓灰质炎病例存在,有时候还是致命性的。在病毒潜伏期,通过检测粪便或咽喉冲洗物中的传染原或检测血液中的抗体可诊断脊髓灰质炎。血液抗体的检测通常是通过中和检测进行的,双份血清检测有滴度差异,所以三种类型脊髓灰质炎病毒必须分别检测。最近,脊髓灰质炎IgG ELISA实验用类似白喉和百日咳的方法进行了改进,这种新的ELISA试剂盒可同时检测三种类型的脊髓灰质炎病毒。这种血清学反应是由既往感染或免疫接种所导致的。
【检测原理】
此ELISA试剂盒是一种利用夹心法的固相酶联免疫试剂盒。微孔用抗原包被,样品中的特异性抗体结合到微孔中抗原上,之后加入对人IgG具有特异性的酶标二抗。之后再加入底物液,微孔中溶液所显示的颜色强度与检测到的特异性抗体的量成正比。样品的结果可直接从标准曲线上获得。
【检测步骤】
1) 加100ul标准品(A-D)和已稀释的样本于相应反应孔中.定性检测中标准品仅用标准品B.
2) 封板后室温(18℃-25℃)温育60分钟。
3) 弃去孔中反应液,每孔用300ul洗涤液洗板3次,吸水纸上拍干。
4) 加100ul酶联物于每个反应孔中。
5) 封板后室温(18℃-25℃)温育30分钟。
6) 弃去孔中反应液,每孔用300ul洗涤液洗板3次,吸水纸上拍干。
7) 每孔加TMB底物液100ul。
8) 室温(18℃-25℃)避光温育20分钟。
9) 依加底物的顺序每孔加100ul终止液。
10) 1小时内在450nm处读吸光度。