【前言简介】
巨细胞病毒(CMV)是疱疹病毒群(β亚家族,150-200nm的DNA病毒)的一个成员。这些病毒具有在体内长期保持休眠状态的特征能力。最初的CMV感染可能没有什么症状,随后总是出现长时间的、不明显的感染,在此期间病毒驻留在细胞中,没有引起可检测的损伤或临床疾病。通过药物治疗或疾病对身体免疫系统的严重损害,不断地使病毒从潜伏或休眠状态重新激活。CMV普遍存在于所有地理位置和社会经济群体中,并感染了50%-85%的成年人。CMV感染在发展中国家和社会经济条件较低的地区更为普遍。对绝大多数人来说,CMV感染并不是一个严重的问题,但对某些高危群体却可能会带来严重后果。
【检测原理】
特异性抗体的定性免疫酶学测定是基于ELISA(酶联免疫吸附试验)技术。微孔板上包被特定的抗原,以结合样品的相应抗体。洗涤微孔以去除所有未结合的样品材料后,添加酶联物(HRP),与捕获的抗体结合。在第二个洗涤步骤中,未结合的共轭物被去除。通过加入四甲基联苯胺(TMB)底物,得到蓝色反应产物,可以观察到结合结合物形成的免疫复合物。该产品的强度与样品中特异性抗体的数量成正比。加入终止液以终止反应,蓝色变成了黄色。使用酶标仪器读取450/620nm处的吸光度。
【试剂盒组成】
1)微孔板 12x8,包被巨细胞病毒抗原
2)样品稀释液 1×100ml,磷酸盐缓冲液(10mM),pH 7.2 ± 0.2,即用型
3)终止液 1×15ml,硫酸,0.2mol/L,即用型
4)洗涤浓缩液 20倍浓缩,磷酸盐缓冲液(0.2M),1×50ml,pH 7.2 ± 0.2
5)酶联物 1×20ml,过氧化物酶标记的人IgG抗体,即用型
6)底物液 1×15ml,3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB),即用型
7)阳性质控 1×2ml,即用型
8)临界质控 1×3ml,即用型
9)阴性质控 1×2ml,即用型
10)封板纸 1x
11)使用说明书 1x
检测步骤
1)加100µL标准品或质控品和稀释的样品至相应的微孔中,保留A1为空白对照。
2)用提供的封板纸封板。
3)37± 1 °C孵育1小时± 5 分钟。
4)弃掉微孔中的内容物,用稀释的洗涤液冲洗孔3次(每次每孔300µL)。洗涤和吸入的时间间隔应>5s。在吸水纸上用力击打微孔板,以去除残留的液滴。
5)加100µL酶联物至每个微孔中,除了空白孔。
6)室温下(20-25℃)避光孵育30分钟。
7)重复步骤4。
8)加100µL底物液至每个微孔中。
9)在黑暗环境中室温下孵育15分钟。
10)加100µL终止液至每个微孔中。
11)在加入终止液后的30分钟内,用酶标仪读取在450/620nm处的吸光度