【前言简介】
柯萨奇病毒属于一种称为肠病毒的病毒，特别是它们是小核糖核酸病毒。它们分为A和B两大类。大多数柯萨奇病毒感染并不严重。它们通常仅引起轻微的体征和症状，例如发烧，皮疹，喉咙痛，关节痛和头痛。症状通常持续约一周。柯萨奇病毒感染最常发生在幼儿中。A组病毒与无菌性脑膜炎，感冒，急性出血性结膜炎和急性心肌病有关，B组与急性心肌炎和脊髓灰质炎样麻痹有关。
尤其与柯萨奇B型病毒相关的综合征是胸膜炎，也被称为博恩霍尔姆病或恶魔性癫痫病，表现为严重的胸膜胸痛，有时伴有腹痛和呕吐，自觉性脑膜炎，感冒以及心肌或心包感染。
最近的免疫化学技术已用于通过IgM的ELISA试验对CoxB感染进行早期诊断，作为近期感染的血清学标志。
【检测原理】
用来自组织培养的手足口病毒抗原包被微孔板，其中包含其主要亚型。
在第一次孵育中，用稀释的样品处理固相，如果存在抗原，则捕获抗CoxB IgM。洗掉样品的所有其他成分后，在第二次孵育中，通过添加抗过氧化物酶（HRP）标记的抗hIgM抗体来检测结合的抗CoxB IgM。固相上捕获的酶作用在底物/色原混合物上，产生的光信号与样品中存在的抗CoxB IgM抗体的量成比例。
因此，样品中IgM的存在可以通过能够区分阴性和阳性样品的临界值来确定。
在试验中直接在孔中进行IgG抗CoxB的中和，以阻止由于此类抗体在IgM测定中的干扰。
【试剂盒成分】
包被板 1×12×8
可拆，包被有来自组织培养的手足口病毒B抗原。
阴性质控 1×4ml
即用型，淡黄色。
阳性质控 1×4ml
即用型，绿色。
浓缩洗涤液 1×60ml
浓缩型（20×）， 含PBS缓冲液。
酶联物 1×16ml
即用型，红色，含辣根过氧化物酶结合的抗人IgM多克隆抗体。
TMB底物液 1×16ml 含TMB
TMB终止液 1×15ml 含0.3M的H2SO4
样本稀释液 2×60ml即用型
中和试剂 1×8ml 含山羊抗hIgG。
封膜 2×
说明书 1×
【实验前准备】
1. 检查印在外部标签（主容器）上的试剂盒的失效日期。如果过期，请不要使用。
2. 检查液体成分是否未被可见的颗粒或聚集物污染。
3. 用无菌塑料移液器吸取少量的铬（TMB），以检查其是否为无色或浅蓝色。
4. 检查运输中是否没有破损，箱子（主容器）内没有液体溢出。检查包含微孔板的铝袋是否未刺破或损坏。
5. 溶解报告的校准物的内容。
6. 如上所述稀释20x浓缩洗涤溶液的所有内容物。
7. 让所有其他组分达到室温（约1小时），然后将所有液体试剂涡旋轻轻混合。
8. 按照制造商的说明，将ELISA恒温箱设置在+ 37℃并通过用稀释的洗涤液灌注来准备洗板机。设置正确的洗涤周期数（如在仪器验证中找到的那样）。
9. 检查酶标仪是否已打开，或确保在读数前至少20分钟将其打开。
10. 如果使用自动工作站，请打开电源，检查设置，并确保使用正确的测定规程。
11. 检查微量移液器是否设置为所需的体积。
12. 检查所有其他设备是否可用并准备就绪。
13. 如果出现问题，请勿继续进行测试并通知主管。
【检测方法】
该测定必须根据以下报道进行，注意对所有待测样品保持相同的孵育时间。
1. 将样品1：101稀释到适当定义的稀释管中（例如：1000ul样品稀释液+ 10ul样品）。即用型时请勿稀释成分。小心地将所有液体成分在涡流中混合，然后按照以下说明进行操作。
2. 将所需数量的微孔放入微孔支架中。将A1孔留空以进行消隐操作。
3. 在所有孔中分配50ul中和试剂，除了用于空白操作的A1和用于质控的孔中。
4. 在每个正确鉴定的孔中，一式两份分配100ul阴性质控，100ul阳性质控单份和100ul稀释样品。
5. 在+37℃下孵育微孔板60分钟。
重要说明：仅当手动进行测试时，才必须使用随附的粘性密封箔将条密封。使用ELISA自动仪器时，请勿覆盖板条。
6. 如前所述（9.3节），用自动洗板机清洗微孔板。
7. 将100ul酶联物加入除A1孔以外的每个孔中，封膜。检查该红色组分是否已分配到所有孔中，A1除外。
重要说明：不要用填充有酶联物的尖端接触孔的塑料内表面。可能会发生污染。
8. 在37℃下孵育微孔板60分钟。
9. 按照步骤6洗涤微孔。
10. 将100ul底物混合物移入每个孔中，包括空白孔。在室温（18℃-24℃）下避光孵育微孔板20分钟。
11. 使用与步骤9相同的移液顺序，将100ul硫酸加入所有孔中。添加酸将使阳性质控，质控血清和阳性样品从蓝色变为黄色。
12. 按照9.5节所述，在450nm滤光片（读数）和620-630nm（强烈建议扣除背景）下测量每个孔中溶液的颜色强度，使仪器在A1上空白。
