【前言简介】
流行性感冒是呼吸道的一种急性发热病毒感染。这种感染大多由飞沫传染所致，并成为一种流行病。这一病毒以及它的毒素可导致支气管黏膜出现严重的炎症，也可使支气管受到损害。1到3天的潜伏期后，感染症状就会突然出现：之后会出现体温急剧升高，常常还伴随有颤抖，出现鼻黏膜炎的主要症状，还会出现令人疼痛的干咳，气管炎，喉炎和常发性的鼻炎与结膜炎。流感病毒可组成一主要形态学、化学和生物学特性相似的病毒群体。我们将流感病毒分A、B和C三大类，其中也包括很多其它的变种。根据其核蛋白和基质蛋白的不同抗原性，我们可以区别流感病毒的不同类型。但实际上起免疫作用的抗原是红细胞凝集素和神经氨酸苷酶。这两种抗原都是表面抗原，都可表现为持久的抗原可变性，叫做转换。因而会出现新的流行性感冒，而且抗原的可变性可促进它的流行性。流感病毒类型（A、B和C）的确定给临床医生和流行病学家进行进一步诊断提供了重要指示。因而我们知道了流感病毒B可导致严重的临床病程，也可使其病毒流行扩散。同样的，在流感病毒A的传染中，流行病学的价值以及机体保护的检测方法就变得很重要了。
【检测原理】
此固相ELISA试剂盒利用的夹心法，微孔板上包被了抗原。用对人IgM具有特异性的酶标二抗来检测结合到包被抗原上的样品特异性抗体。底物反应后，所显示的颜色强度与检测到的IgM特异性抗体的量成正比。样品的结果可直接使用标准曲线获得。
【检测步骤】
1) 加100µL标准品和已稀释样本于相应反应孔中，在定性检测中只使用标准品B。
2) 封板后室温（18℃-25℃）温育60分钟。
3) 移去封板纸，弃去孔中液体。用300µL洗涤液洗板3次，在吸水纸上拍干。
4) 在每一微孔中加入100µL酶联物。
5) 封板后室温（18℃-25℃）温育30分钟。
6) 移去封板纸，弃去孔中液体。用300µL洗涤液洗板3次，在吸水纸上拍干。加底物液和终止液时，如果有条件的话，可使用8孔微量移液器。确保底物液和终止液都是相同的时间间隔加入。使用确切容积并避免气泡产生。
7) 每孔加TMB底物液100µL。
8) 室温（18℃-25℃）避光温育20分钟。
9) 在每一微孔中加入100µLTMB终止液以终止底物反应。轻轻摇动微孔板以使试剂混合均匀。此时，颜色蓝色变成黄色。
10) 加终止液后60分钟内在450nm处测OD值。
【结果计算】
质量控制
严格按照实验步骤的实验结果才是有效的。使用者必须严格遵守实验室优化管理规定或其他的实验标准。按照质控单的要求，所有的标准品浓度都必须在一个可以接受的范围内。如果其标准不符合要求，那么实验则无效，必须重做。每个实验室应当使用已知浓度的样品做进一步的有效质控。如果实验背离实际结果，应检查以下问题：试剂有效期，贮存条件，取样器，实验设备，温育时间，清洗方法。
定性评估
临界值是直接从标准品B中得出。临界指标（COI）是由样本的平均OD值和临界质控的平均OD值计算得出来的。如果样本的平均OD值在临界值±20%内，则该样本应判定为可疑样本；OD值高于临界值则为阳性，反之为阴性
定量评估
在半对数坐标纸上或自动计算的方法，以标准品的OD值（Y轴，线性）对其浓度（X轴，对数）做一条标准曲线。使用三次回归、四参数或双对数曲线方程可以得到更好的标准曲线。在推算标准曲线时，应当充分利用好每一个标准品数值（明显逸出的数值应当被忽略，再使用更加合理的数值代替它）。样品的浓度可以从标准曲线上直接读取。从坐标纸上读取结果时应当把起始的稀释倍数考虑进去。将稀释了的样品结果乘以稀释因子即可得到其相应的结果。样品中抗体浓度高于最高标准品的样品，应当按实验前准备说明所述的方法进行稀释，并重新检测。
