【前言简介】
査菲埃立克体以及人粒细胞无形体都是通过蜱传播的人类病原体。试剂盒使用了半纯化的原质小体以及桑椹胚(来自于细胞培养)。为了得到最好的粘附力以及背景参照,抗原分布在细胞基质中。仅供科研使用。
【检测原理】
査菲埃病人血清样品使用缓冲液稀释后加入到单独的孔中进行温育,使血清中的抗体与孔中抗原相结合。洗涤一次以洗去未反应的血清蛋白,然后加入荧光标记的抗人IgG抗体。再次洗涤洗去未结合的标记物。之后通过荧光显微镜进行观察。阳性结果可以观察到边界清晰的苹果绿荧光显色的包含物(桑椹胚)以及小的球菌在红色的细胞基质背景中。从左向右观察,左边的抗原是人粒细胞无形体,右边的是査菲埃立克体。阳性结果随后继续检测以得出最高的滴度。
【检测方法】
1. 所有病人样本用洗涤液进行预处理。
2. 按需要稀释阳性质控。(注:所提供的阳性质控已经稀释过)。
3. 对应孔中加入稀释好的病人样品,阴性质控以及稀释好的阳性质控。
4. 将玻片放入湿盒中,37℃下温育。
5. 将玻片取出,使用洗涤剂洗涤。
6. 孔中加入荧光标记物,放回到湿盒中,37℃下避光温育。
7. 重复步骤5。
8. 玻片上滴加封固剂,盖上盖玻片。
9. 使用荧光显微镜在400× 视野下,观察玻片。玻片可在2-8℃下避光保存24小时。
【结果说明】
1:80筛查滴度阳性:1:80或者更高滴度的阳性说明存在感染。当1:80阳性时,应进一步进行检测,以得出终点滴度,从而比较同一病人前后的抗体变化。
1:80阴性:不存在感染。
【局限性】
査菲埃立克体与犬埃立克体、伊氏埃立克体存在交叉反应。
可通过其他替代方法进行区分,包括免疫印迹法。