前言说明
斑点热立克次体是通过螨,扁虱类等传播的世界性病原体.如西半球的立氏立克次体,地中海地区,非洲,印度的康氏立克次体.其它地方也陆续发现有斑点热立克次体的变异株.
斑疹伤寒立克次体是通过虱子,跳蚤等媒介传播的病原体.包括在世界范围内都有出现过的莫氏立克次体,普氏立克次体. 通过检测其抗体来辅助检测人体内是否感染此类疾病.
样本收集
先将疑有 斑点热立克次体 患者的全血放置凝结后再离心分离血清. 转移到一个无菌的密封容器,储存于2-8℃.如果血清样本保存时间超过5天,需置于-20℃或更低保存.
急性期样本，立即采集；
恢复期样本，需每隔2周或4周，采血一次，观察滴度变化。
斑点热立克次体 样品和试剂的准备
1洗涤缓冲液的准备
加PBS包装组分于纯化水中,混匀.
2筛查稀释液的准备
首先在洗涤缓冲液中稀释血清，然后进一步稀释使用IgG样品稀释液。 充分混合并使该混合物在环境温度下温育。 这种稀释度称为筛选稀释度。 对于阳性血清的进一步稀释，用洗涤缓冲液（PBS）稀释筛选稀释液。
实验步骤
1将阳性质控稀释至系列倍比浓度，包含其中一份高于最大稀释滴度，一份低于最大稀释滴度。 注意,所有瓶装的质控品已预先按筛选稀释度的比例稀释.
2对于每个血清稀释液，移液加入到一个载玻片孔中并记录该位置以供以后参考。对于每个测定，包括步骤1中制备的阳性对照和阳性对照的系列稀释。另外在一个孔中加入1滴阴性对照。应将样品应用于孔的顶部或底部边缘，避免在含有抗原微点的中间部分。
3置反应片于湿度箱并在37+/-0.5℃下孵育
4从培养箱或水浴中取出湿度箱。还要取出取出复合物。用PBS慢慢冲洗载玻片孔，每次洗涤1排孔以避免混合样品。然后将载玻片浸入装有新鲜PBS的容器中至少5分钟。
5将载玻片在蒸馏水中短暂浸泡并使其风干。
6各加一滴IgG复合物于各片孔中,重新置于湿度箱, 在37+/-0.5℃下孵育。孵育时应避光,保护光敏的复合物.
7按上面步骤4-5洗片.
8加封固剂于各片中并盖上盖玻片.
9在400倍的放大倍数下的显微镜观察染色片.样品通过与阳性和阴性质控的强度,外观等对比进行判定. 染色片在2-8℃下避光可保存24小时
