【前言简介】
博氏螺旋体是螺旋体科细菌，是莱姆病的病原体，在欧洲和美国普遍存在，莱姆病伴随有广泛的临床症状，是种多系统性疾病，急性期间典型的症状是慢性游走性红斑，常常伴随有类烟管症状，后期可能还会出现心脏、神经和关节等多系统疾病。莱姆病的整个发病阶段都可以使用抗生素治疗，因此，安全，有效的的莱姆病早期实验室诊断很重要，早期治疗应引起重视
IgM抗体通常出现在感染后3周左右，IgG抗体在4-6周后出现，早期的免疫反应主要是针对鞭毛蛋白肽（41kDa）和OspC（外表面蛋白C，23kDa），然后会蔓延越来越多的细菌蛋白
此试验中采用了莱姆氏特异性14kDa鞭毛蛋白片段作为重组蛋白与抗体结合，大肠杆菌产生的鞭毛蛋白与莱姆氏的其他三种亚种完全一致。酶免法与IFA,凝集试验和免疫印迹法相比较，结果显示，酶免法诊断特异性较高，早期免疫反应灵敏度增加。另外此试剂盒还有重组的14kDa鞭毛蛋白片段天然OspC蛋白作为包被抗原
通常情况下急性期IgM高滴度，当莱姆病有所好转（由于治疗或自发地）或慢性阶段时，IgG抗体滴度增高而IgM含量低或是没有，此试验可用于诊断需接受治疗的急性和慢性阶段的莱姆病患者，而无需再治疗的莱姆病好转的患者检测结果不会显示阳性。
【检测原理】
此试剂盒基于夹心酶免法，包被有抗原，样本中的特异性抗体与之结合，通过抗人IgM酶标二抗检测，然后加入TMB底物液，发生颜色反应，颜色强度与样本含量成正比，样本结果可从标准曲线或临界标准品得出。
【储存条件】
试剂盒和运输环境和储存环境温度为2-8℃，避免热源或太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂的准备将在相关章节中阐述。开封后的板条密封于2-8℃的环境下有效期为3个月。
【试剂盒组成成分】
1×12×8
MTP
包被板，可拆，微孔中包被了抗人IgM的抗体。
1×15mL
ENZCONJ
酶联结合物，绿色，即用性，HRP标记的抗人IgG抗体
4×1.5mL
CONTROL A-D
A-D标准品: 含量为: 2; 10; 50; 200 U/mL，其中标准品B作为Cutoff标准品,内含人抗莱姆氏螺旋菌IgG抗体，稳定剂
1.5mL
CONTROL+
阳性质控，即用，内含人抗莱姆氏螺旋菌IgG抗体，稳定剂
1.5mL
CONTROL-
阴性质控，即用，内含人血清和稳定剂。
1×100mL
DILBUF
稀释用缓冲液，蓝色，内含磷酸缓冲液、去垢剂、BSA和稳定剂
1×100mL
WASHBUF
洗涤液（10×），内含磷酸缓冲液、去垢剂和稳定剂。
1×15mL
TMB SUBS
TMB底物液，即用，内含TMB。
1×15mL
TMB STOP
TMB终止液，即用，含1M H2SO4
检测步骤
1) 将标准品、质控品、稀释样本分别100μL加入包被板的微孔中。定性检测只需加入标准品B。
2) 盖板，37℃下温育60min。
3) 弃取微孔内反应液，每孔用300ul的已稀释好的洗涤液洗3次，在吸水纸上将板拍干。
4) 在每一微孔中加入100μL的二抗酶结合物。
5) 盖板（新的粘性金属板），37℃下温育30分钟。
6) 弃取微孔内反应液，每孔用300μL的已稀释好的洗涤液洗3次，在吸水纸上将板拍干。
7) 如果可以的话，使用8道移液器加底物液和终止液。加底物液和终止液的时间间隔应当相同，使用自动置换型移液器并避免气泡产生。
8) 每孔加100μL TMB底物液
9) 18-25℃下避光温育30min（无须盖板）
10) 每孔加100ulTMB终止液以终止底物反应。此时，微孔内溶液由蓝色变成黄色
11) 加终止液后，60分钟内在450nm处测OD值（参比波长：600-650nm）
定性判断：
标准品B的OD值可以作为判断阴阳性结果的Cutoff值，样本OD之在Cutoff值上下10%范围内，则结果位于灰区内，判为可疑。如果高于Cutoff值则判为阳性，低于Cutoff值则判为阴性。
定量判断：
在半对数坐标纸上或用自动生成的方法，以标准品的OD值为Y轴，浓度为X轴，绘制一标准曲线图。用立体图、4参数对数图或对数-对数图都可获得良好的实验结果。对于标准曲线图，用标准品的每一单值进行计算（样品结果明显异常的值必须删除掉，应使用更加合理的单值）。样品的浓度可直接从标准曲线上获得。一旦样品稀释了，就应当乘以相应的稀释因子。如果样品所测得的浓度高于最高标准，则应根据实验前的准备说明所述对样品进行稀释，并重新检测。
