斑点热组立克次体(SFG)在世界范围内都有发现,通常由蜱虫来介导,蜱虫的叮咬转移了这种生物的更自然宿主产生的感染。随后的感染诱导了特异性抗体应答,该抗体应答可以被检测并用作鉴定感染人类的间接手段。
检测原理:
此试剂盒中的微孔包被了外膜蛋白(rOmp A和rOmp B),它们包含物种特异性和反应性更广泛的决定簇。此测定法中使用的抗原是从立氏立克次体中纯化的,但仍会与蒙氏立克次体,帕克立克次体和其他在美洲发现的密切相关的物种的抗体发生反应。将患者血清在样品稀释液中稀释并在包被的微孔中孵育,以使血清抗体与固相抗原结合。然后洗涤微孔以去除未反应的血清蛋白并添加酶标记的抗人IgM(酶联物)以标记结合的抗体。温育期后,洗涤微孔以除去未结合的酶联物。然后加入酶底物(TMB底物)以定量结合物的结合过氧化物酶部分。显色与活性血清抗体的量成正比。通过终止溶液中断此反应,该溶液将蓝色反应变为黄色并稳定最终的颜色强度。在酶标仪或分光光度计上在450nm的波长处测量色强度(吸光度)。
试剂盒成份:
1.包被板
即用型,可拆,微孔中包被了立式立克次体的OMP抗原。
2.样本稀释液
内含磷酸缓冲液、Tween20、BSA。
3.IgM或gG血清
缓冲液中包含有羊抗人IgG(Fc(γ)-特异性),即用型。
4.酶联物
亲和纯化的HRP羊抗人IgM(µ链-特异性),即用型,避光。
5.阳性质控
1:10稀释,蓝盖瓶装,内含人阳性血清。
6.临界校准品
1:10稀释,绿盖瓶装,可疑反应血清。
7.阴性质控
1:10稀释,红盖瓶装,内含人阴性血清。
8.底物液
即用型,内含H2O2和TMB,即用型,避光。
9.终止液
即用型,含 H2SO4
10.PBS
将包装内容物加到1L去离子水中,重复混匀。