前言:
人尿调节素检测试剂盒检测的项目是尿调节素,这种激素是在肾小管髓袢升支粗段的上皮细胞内质网上产生的一种高度器官特异性的蛋白质,产生后会在高尔基体中进行加工并被运送到顶端细胞膜作为GPI连接分子,再通过蛋白酶裂解释放到尿液中,部分被释放到血液中。
从尿中排泄的尿调节素可能是以单一蛋白质的形式排泄,也可能是聚集并以透明管型排泄,具体以何种情形取决于尿液的性质和疾病的状态。
相对而言,因尿调节素在血液中是以单一形式存在,所以如果定量检测尿调节素,更适于以血液作为测量样本以评估肾功能的变化:在个体的肾功能异常的情况下,此种激素水平倾向于下降;同时,即使在健康个体中,随着其年龄增长,肾功能逐渐下降,尿调节素的水平也会呈现出长期下降的趋势,人尿调节素检测试剂盒的检测灵敏度高,可以监测到这种变化,为临床的判断提供重要依据。
人尿调节素检测试剂盒的检测步骤介绍如下:
1) 确定样本空白孔,并加入100µL EIA缓冲液。
2) 将100µL样本和标准品加入相应的孔中
3) 封板,在37℃下孵育60分钟
4) 弃去孔中内容物,每孔加入350µL洗涤缓冲液洗涤4次,结束后在吸水纸上拍打微孔板以除去残留液体
5) 将100µL标记抗体加入每个孔中
6) 封板,在37℃下孵育30分钟
7) 弃去孔中内容物,每孔加入350µL洗涤缓冲液洗涤5次,结束后在吸水纸上拍打微孔板以除去残留液体
8) 将100µL显色剂加入每个孔中
9) 在室温下避光孵育30分钟(无需封板)
10) 将100µL终止液加入每个孔中
11) 测量450nm处的吸光度(参考波长:600-650nm)
结果计算
以标准品的OD值为纵坐标,相对应的浓度为横坐标, 使用适当的回归曲线拟合(如二次回归曲线)。
在标准曲线上根据样本吸光度读取相应的浓度
计算浓度时需乘以相应的稀释因子