胎盘生长因子检测步骤
每次运行必须包括标准曲线。所有标准品,样品和对照应一式两份。 所有标准,样品和控制应同时运行,以便所有测试条件都相同.
1)将所需数量的板条固定到板架上。
2)将标准品、质控品和已稀释的样品分别用新的一次性塑料加样头取样加入到相应的微孔中。
3)将测定缓冲液分配到相应的孔中。
4)室温下不封盖温育。
5)快速甩掉微孔内的遗留物,每孔用蒸馏水洗板3次,在吸水纸上拍干,以清除残留液体。
6)在每一微孔中加入酶联物。
7)室温下不封盖温育。
8)快速甩掉微孔内的遗留物,每孔用蒸馏水洗板3次,在吸水纸上拍干,以清除残留液体。
9)在每一微孔中加入酶联复合物。
10)室温下温育。
11)快速甩掉微孔内的遗留物,每孔用蒸馏水洗板3次,在吸水纸上拍干,以清除残留液体。
12) 在每一微孔中加入底物液。
13) 室温下温育。
14) 在每个微孔中加终止液(Stop Solution)终止酶反应。
15) 加终止液(Stop Solution)后10分钟之内,用酶标仪在450±10nm波长处测定OD 值。
背景说明:
胎盘生长因子可以作为诊断辅助手段来估计孕妇先兆子痫的概率。血管生成和血管转化是胎盘正常发育的重要过程。异常的血管生成和血管转化被认为是先兆子痫妊娠和胎儿宫内发育迟缓的主要原因之一。 胎盘生长因子PLGF是VEGF家族的一员,主要由胎盘产生并且是有效的血管生成因子。 相应的受体,可溶性fms样酪氨酸激酶-1被认为具有血管生成特性。
临床意义:
胎盘生长因子是一种高度特异性的标志物,胎盘合体滋养层细胞有供氧压力时PLGF水平显著降低,使用Quidel Triage PLGF可用来评估胎盘功能不全,以及对由此引起的子痫前期进行预测、鉴别和治疗监测。
1 正常妊娠时血液PLGF水平的变化趋势
合体滋养层细胞分泌胎盘生长因子(PLGF)在子宫螺旋动脉重塑过程中,能促进血管生成,改善血流灌注。正常妊娠时,随妊娠进展血清中PLGF水平呈峰形。健康孕妇血清PLGF妊娠过程中的变化:孕5~15周PLGF水平低,15-26周PLGF表达迅速增加,在妊娠28~30周达高峰 。
妊娠早期胎盘循环未完全建立,胎盘处于相对缺氧状态,此时PLGF水平较低;妊娠10~12周时,绒毛间隙血流建立,胎盘发展至妊娠中期,母体血流增加,氧分压上升,胎盘管生成主要由分支结构向非分支结构转变,而PLGF主要调节非分支血管的生成,PLGF合成也逐渐增加;妊娠28~30周时达到高峰之后胎盘逐渐成熟老化,PLGF水平也随之明显下降。
2 胎盘生长因子(PLGF)可用来评估胎盘合体滋养层细胞病及其并发症
胎盘绒毛拥挤使得合体滋养层细胞有供氧压力,PLGF水平显著降低,导致胎盘发育不良和胎盘功能不全,难以给胎儿提供充分的养分和氧气,可能引发一系列的疾病,诸如流产、妊娠期高血压、子痫前期(PE)、胎儿生长受限和早产等,情况严重时还会引起相关并发症,诸如死胎、子痫、HELLP综合征和胎盘早剥等。
3 预测子痫前期
一项SCOPE前瞻性研究分析了孕14-16周低危初产妇,在多中心(新西兰、澳大利亚、英国和爱尔兰)进行临床试验,入选3529例单胎初产妇(187例发展为PE),在评估母体危险因素(生育治疗史、PE家族病史、平均动脉压)情况下,结合PLGF评估AUC可达0.84 。
孕11-16周在评估母体危险因素(参考NICE指南)的基础上,联合考虑胎盘生长因子(PLGF≤87 pg/mL )和平均动脉压(MAP>85 mmHg)进行子痫前期医学量表综合分析,可提高高危人群检出率。
4 鉴别区分胎盘源性的子痫前期
子痫前期的临床症状与慢性高血压、肾病, 系统性红斑狼疮、血小板异常性出血、糖尿病血管并发症、妊娠引起的急性脂肪肝等疾病的症状相似,通过检测PLGF水平(参考值为100pg/mL)可以鉴别区分出胎盘源性的子痫前期。
5 采取合理措施降低子痫前期发生风险
早中孕期评估子痫前期的发生风险,对高危人群通过服用低剂量阿司匹林和补充钙质等方法可使子痫前期平均发生风险大大降低。
6 子痫前期的危险分层和监测
可以通过对胎盘生长因子(PLGF)水平对胎盘发育情况进行定量评估:PLGF≧100pg/ml提示胎盘功能正常;PLGF<100pg/ml提示胎盘功能不全,需要支持胎盘灌注的治疗。PLGF<12pg/ml提示严重胎盘功能不全,强烈预示14天内早产 。如果治疗干预延缓了早产的发生,胎盘功能改善时PLGF水平加速上升。通过监测PLGF水平可评估早产治疗后胎盘功能改善的效果。
7鉴别胎儿宫内生长受限
使用胎盘生长因子(PLGF)可以区分胎盘源性的宫内生长受限。天生小样儿和正常胎儿体内PLGF水平正常升高,而宫内生长受限胎儿PLGF水平显著低于正常妊娠人群参考值5百分位(20-23周参考值为60 pg/mL,24-31周参考值为130 pg/mL,32-35周参考值为70pg/mL) 。