γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）是一种氨基酸类神经递质，也是中枢神经系统中非常重要的抑制性神经递质。在近年研究中发现：老年痴呆、抑郁、焦虑、精神分裂和癫痫等精神病症，与GABA的水平异常及其受体功能障碍有关，
【试剂盒检测原理】
γ-氨基丁酸的定量检测采用ELISA方法进行。
竞争性ELISA使用微量滴定板。抗原与微孔板的固相结合。标准品，质控品和样品以及固相结合分析物的酰化分析物浓度竞争固定数量的抗血清结合位点。当系统处于平衡状态时，通过洗涤除去游离抗原和游离抗原-抗体复合物。使用TMB作为底物，通过抗兔IgG-过氧化物酶联物检测与固相结合的抗体。在450nm监测反应。
注意：γ-氨基丁酸的定量数据读取时，应当把标准品浓度和OD值做标准曲线，未知样本的浓度通过他们的OD值在标准曲线上读取。
检测实验所需器材（但试剂盒未提供）
1） 校准过的精密移液器，可分配10 – 400 µl，1ml，10ml之间的体积；
2） 微量滴定板清洗设备（手动，半自动或自动）
3） 酶标仪，能够读取450 nm和620-650 nm的吸光度
4） 振荡器（振荡幅度3 mm；约600 rpm）
5） 涡旋混合器
6） 吸收材料（纸巾）
7） 水（去离子水，蒸馏水或超纯水）
【贮存与稳定性】
γ-氨基丁酸的试剂盒应当在2-8度保存，效期内有效，不要使用过期产品。一旦开封，试剂盒2-8度保存一个月内有效。开封后，酶标板用袋子密封并储存于2-8℃的环境下。
【样品的采集与储存】
血浆：
样本采集时，应将全血收集到含有EDTA作为抗凝血剂（用于血浆的Monovette TM或Vacuette TM）的离心管中，并在收集后立即在室温下离心。建议儿童禁食标本或预喂标本（最后一餐后2-3小时）。溶血性和特别是脂血性样品不应用于测定。
检测r-氨基丁酸的血样储存：在2-8°C下长达24小时，在-20°C下长时间（最长6个月）。
血清：
通过静脉穿刺收集血液（Monovette TM或Vacuette TM用于血清），允许凝结，并通过在室温下离心分离血清。在完成凝血之前不要离心。接受抗凝治疗可能需要增加凝血时间。
建议儿童禁食标本或预喂标本（最后一餐后2-3小时）。
溶血性和特别是脂血性样品不应用于测定。
储存：参考血浆样本，应避免反复冻融。
尿液：
可以使用在含有10-15ml 6M HCl的瓶子中收集的自发尿液或24小时尿液。
如果使用24小时尿液，请记录收集的尿液的总体积。如果酸的最终浓度百分比太高，则稀释剂的缓冲容量不足。则不会定量提取。
检测r-氨基丁酸的尿液样本储存：-20°C下较长时间（最长6个月）。应避免反复冻融。避免阳光直射！
r-氨基丁酸的检测程序（25-2500ng/mL）
1. 提取：
(1) 加入300ul稀释过的标准品，质控品和未稀释的样本到提取板的相应板孔中。
(2) 每孔加入300ul稀释剂，封板，室温下（20 – 25 °C）振荡器（600rpm）孵育30min。
(3) 洗板2次，弃去溶液，并在吸水纸上拍干。每孔加入100ul I-缓冲液，并在振荡器（约600rpm）下在室温（20-25℃）下孵育5分钟。该过程重复2次。
(4) 弃去溶液，并在吸水纸上拍干。
(5) 在提取板相应的空中加入250ul洗脱缓冲液，封板，室温下（20 – 25 °C）振荡器（600rpm）孵育10min。
(6) 使用100μl进行后续衍生化。
2. 衍生化：
(7) 在酶标板中加入100ul提取的标准品，质控品和样本。
(8) 每孔加入10ul NaOH。
(9) 每孔加入新鲜配制的平衡试剂50ul并在振荡器（约600rpm）下孵育1min。
(10) 每孔加入10ul D-试剂。
(11) 封板，室温下（20 – 25 °C）振荡器（600rpm）孵育2小时。
(12) 每孔加入150ul Q-缓冲液。
(13) 室温下（20 – 25 °C）振荡器（600rpm）孵育10min。
(14) 使用25 ul进行后续的ELISA实验。
3. GABA ELISA：
(15) 在酶标板中，每孔加入25ul衍生化的标准品，质控品和样本。
(16) 每孔加入50ul抗血清，并轻轻混匀。
(17) 封板，2-8 °C孵育15-20小时（过夜）。或者在振荡器（约600rpm）下在室温（20-25℃）下孵育2小时。
(18) 移去封板膜，将孔中溶液弃去。每孔加入300ul洗涤液洗涤3次，每次洗板都要在吸水纸上拍干。
(19) 每孔加入100ul的酶联物。
(20) 室温下（20 – 25 °C）振荡器（600rpm）孵育30min。
(21) 将孔中溶液弃去。每孔加入300ul洗涤液洗涤3次，每次洗板都要在吸水纸上拍干。
(22) 每孔加入100ul底物液，室温下（20 – 25 °C）振荡器（600rpm）孵育20-30min，避免阳光直射。
(23) 每孔加入100ul终止液，并混匀。
(24) 10min内，在450nm处读取OD值（参考波长620和650nm）。
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