【前言简介】
新喋呤生物合成与细胞免疫系统的活性关系密切，据报道在病毒感染病人新喋呤升高，认为升高源于直接防御病毒感染细胞的免疫应答。已证实抗原刺激人外周血单核细胞可引起新喋呤释放入细胞培养液中，人巨噬细胞在体外培养时受γ-干扰素刺激产生新喋呤。人体液中新喋呤水平的测定为细胞介导免疫的相关疾病监测提供了一种有用和创新的工具。许多传染病，新喋呤水平升高先于临床表现和血清变化。通常样本不会进行所有可能的传染病测定，因此为了降低输血传染的危险性，对献血员样本进行新喋呤测定是有意义的。
测定新喋呤的其它诊断应用有：
1) 重复损伤的ICU病人
2) 用于预测HIV感染和恶性疾病
3) 移植手术后病人并发症的早期预测
4) 自身免疫性疾病、疾病活动的指征
5) 病毒感染的诊断
6) 急性病毒和细菌感染的鉴别诊断
7) 慢性感染复发和免疫刺激治疗的监测
【试剂盒组成成分】
微孔板 12×8
微孔中包被了羊抗兔IgG（多克隆）
抗血清 1×8ml
即用型、含抗血清（兔）、磷酸盐缓冲液、稳定剂
酶联物 1×13ml
即用型、含HRP标记的新喋呤、磷酸盐缓冲液、稳定剂、避光保存
标准品A~F 6×1.5ml
浓度：0、1.35、4.0、12.0、37.0、111nmol/L
即用型、含新喋呤、磷酸盐缓冲液、稳定剂
质控1+2 2×1.5ml
即用型、浓度/可接受范围见质控单
分析缓冲液 1×21ml
即用型、含磷酸盐缓冲液、BSA、稳定剂
洗涤液 1×50ml
20倍浓缩、含吐温、稳定剂
底物液 1×19ml
含TMB、缓冲液、稳定剂
终止液 1×19ml
即用型、含1M硫酸
封板纸 1×
【储存条件】
该试剂盒运输和储存的温度为2~8℃。避免直接的光照和加热。微孔板拆封后保存在密封袋中2~8℃，可以稳定至有效期。
【样本要求】
血清、血浆（EDTA）
按照静脉穿刺的常规注意事项采集样品，血液样品自采集到实验时都必须保证其化学完整性。不要使用明显溶血、黄疸和脂血样品。使用的样本不含NaN3。混浊的样品应当在实验开始前离心以除去所有的颗粒性物质。
储存 2-8℃ ≤-20℃
稳定性 72小时 6个月
避免太阳直射，避免反复冻融。
尿液
实验必须使用自然产生的尿液，也可使用24小时内产生的尿液。收集病人24小时内产生的尿液于一个容器中。为了计算结果，请确定尿液的总体积。实验开始前请先将样品离心。
储存
2-8℃
≤-20℃
稳定性
72小时
6个月
避免太阳直射，避免反复冻融。
【检测方法】
实验前制备说明
以下的体积为一次实验检测4板板条（32孔）
稀释
成分
稀释剂
15ml
洗涤浓缩液
285ml双蒸水
比例 1:20
储存 2~8℃
稳定性 1个月
样本稀释
血清、血浆：不需要稀释，避免阳光直接照射
尿液：使用实验缓冲液按1:101稀释
如10ul+1000ul，避免阳光直接照射
样本的浓度高于最高标准品的，必须进一步稀释。
检测步骤
1. 移取20ul的标准品、质控品、血清、血浆和稀释的尿液样本至相应的孔中
2. 每孔加入100ul的酶联物
3. 每孔加入新喋呤抗血清50ul
4. 盖板，避光在振荡器（500rpm）、室温（18~25℃）下温育90分钟
5. 移去封板纸，倒出孔中溶液，洗板4次，每次每孔使用300ul稀释的洗涤液。在吸水纸上拍干
6. 对于底物液和终止液的使用，建议使用8通道的移液器，确保每孔加入的时间间隔是相同的。避免气泡的产生
7. 每孔加入150ul的底物液
8. 室温（18~25℃）下温育10分钟
9. 每孔加入150ul的TMB终止液终止反应。轻轻震动包被板使溶液混匀
10. 在15分钟内于450nm的酶标仪上读数（参考波长是600~650nm）
【结果计算】
质量控制
该实验结果只有在按照说明书操作才有效。此外，使用者必须严格按照GLP规范或者其他适合的准则/法律。所有的试剂盒质控品必须在标签和QC证书的可接受范围内。如果不符合该条件，则实验无效并需要重做。每个实验室应使用已知的样本作为进一步的质控。建议进行适当的质量评价试验。如果有任何的偏差，以下的技术问题应给予证实：试剂的有效期、保存条件、移液器、设备、温育条件和洗涤方法。
结果的计算
标准品的OD值作为Y轴（线性），相应的浓度作为X轴（对数），可以使用半对数坐标纸作图或者使用自动计算方法。良好的拟合可以使用三次样条函数、四参数逻辑函数或者logit-log。对于计算标准曲线，应采用每个标准品的吸光度值（在重复检测中一个明显的异常值应忽略而采用一个更可靠的单值）。样本的浓度可以直接在标准曲线中读出。在坐标纸上读取结果时已经考虑了初始稀释。而更高预稀释的样本结果应乘以稀释因子。样本的浓度高于最高标准品浓度时必须按“实验前制备说明”所述进行稀释并重组实验。
转换：
血清/血浆：
新喋呤：nmol/L x 0.253 = (ng/mL)，(ng/mL) / 0.253 = (nmol/L)
尿液
肌酸酐：(mg/dL) x 88.4 = (μmol/L)，(μmol/L) / 1000 = (mmol/L)，(mmol/L) / 1000 = (mol/L)
新喋呤：(nmol/L) / 1000 = (μmol/L)
实验结果不能作为任何治疗结果的唯一依据，必须与临床症状及诊断检测相结合。
【局限性】
样本采集对检测结果有重大影响，详细见样本采集和储存。
交叉反应相关信息请参照 产品性能指标。
避免使用含叠氮化钠的样品，这些样品将导致错误的实验结果。
