前言简介
骨桥蛋白最初是由骨分离出的一种分泌糖蛋白.目前,已知它是由多种细胞(包括成骨细胞, 肾小管细胞, 巨噬细胞,激活T细胞, 血管平滑肌细胞)分泌的一种强酸性钙结合磷酸化糖蛋白.据报道,它的分子量约为44 kDa -66 kDa ,具体取决于糖基化程度和磷酸化程度.
骨桥蛋白有一个重要的特征,它含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸 氨基酸序列. 这种序列广泛存在于纤连蛋白, 玻连蛋白和多种细胞外蛋白,如αvβ3
骨桥蛋白还有另外一个重要的特征,由于RNA拼接, 糖基化, 磷酸化作用, 硫酸盐化作用和蛋白酶敏感性等, 使体内多种分子都含有骨桥蛋白. 在损伤,发炎, 血管生成,肿瘤组织等部位, 骨桥蛋白和凝血酶都很有可能同时存在. 骨桥蛋白易受解蛋白片段的影响,并发挥重要生理作用. 有报道证明, 经凝血酶处理能增强骨桥蛋白细胞的粘附活性,这表明用凝血酶裂解骨桥蛋白后,能暴露隐藏的粘附序列.最近有证据表明骨桥蛋白的氨基末端片段包含有能识别α9β1整合素的隐藏结合位点.而且,骨桥蛋白含有多细胞结合位点并能与多种受体发生交互作用. 这些交互作用能明显发挥特定的功能.
原理
此小鼠试剂盒骨桥蛋白 ，试剂盒运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与小鼠骨桥蛋白的量成正比.
预期用途
■此IBL小鼠试剂盒骨桥蛋白 试剂盒能用于小鼠EDTA血浆,尿液,细胞上清中骨桥蛋白的定量检测.
注意实验前,将样品冻存于–80°C,因为骨桥蛋白分子非常不稳定
■建议小鼠EDTA血浆样品用PBS稀释100-6400倍. 如果稀释100-6400倍,样品浓度仍超过最高标准品,请进一步稀释后再进行试验.
■用血清和肝素血浆检测的样品的值不能反映真实的浓度, 因为骨桥蛋白不稳定,易受凝血酶裂解. 并且骨桥蛋白分子有几分肝素结合位点, 所以肝素血浆样品的试验结果会受到影响.
■建议尿液样品的稀释倍数超过2000-64000, 但最优稀释倍数应视每个实验室具体优化而定. 由于尿液样品易于分解,建议加入蛋白酶抑制剂(PMSF).而且, 如果样品提取后不能立即检测,请冻存于-80°C或更低. 注意, 反复冻融后样品的检测结果会低于真实值,所以应小心处理.
■细胞上清的稀释倍数随所选取的细胞不同而不同, 具体稀释倍数请按每个实验室优化而定.
■ 试剂盒不能检测凝血酶裂解的骨桥蛋白.
■ 小鼠试剂盒骨桥蛋白 此试剂盒能检测 重组或天然的小鼠骨桥蛋白.
试剂盒成分
1 预包被板: 抗小鼠骨桥蛋白(O-17)兔子IgG,亲合纯化 96T
2 酶标记抗体:
(30倍浓缩)HRP标记抗小鼠骨桥蛋白(O-165)兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1
3 标准品: 重组小鼠骨桥蛋白 0.5mL x 2
4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7 终止液: 1N硫酸 12mL x 1
8 浓缩洗涤液:
(40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1
