细小病毒B19 检测试剂盒检测原理
细小病毒B19 检测一种固相的酶联免疫吸附实验,病人样本用样本稀释液稀释,稀释液中包含有超免疫抗人IgG、IgM抗体,消除特异性竞争抑制,此步的预处理可避免假阴性或假阳性结果。
微孔板的微孔中包被了细小病毒B19抗原。将稀释好的病人样品和即用型的质控品加入到微孔中,温育期间,阳性样品和质控品中的细小病毒B19特异性抗体会结合到固相抗原上。洗板除去未结合的样品,再微孔中加入辣根过氧酶标记的抗人IgG、IgM抗体。在第二次温育中,酶联物会结合到这些特异性的抗体上而产生酶联免疫复合物。第二次洗板除去未结合的酶联免疫复合物。加入TMB底物液后,溶液显示蓝色。之后加入终止液终止酶促反应,此时容易由蓝色变成黄色。溶液所显示的颜色强度与样品中细小病毒B19特异性抗体的浓度成反比,450nm处读取OD值。
基本特征:
人细小病毒B19是常见的 病毒 之一,病毒颗粒直径为23nm,无囊膜包裹,病毒基因组是由3500碱基组成的单链DNA,该病毒属细小病毒科,是红细胞病毒属的成员。B19病毒在分子生物学上有独特性,末端回文序列长达365个碱基,G、C含量高,使得B19病毒二级结构牢固,而不易克隆入细菌中。B19病毒同其他小DNA病毒一样有种属特异性。有两种壳蛋白:VP1(83kD)和VP2(58kD),VP2占优势,VP1位于壳体外部,易与抗体结合。此外B19病毒有一非结构蛋白NSI,可引起细胞死亡,但其作用与细胞毒素或成空蛋白不同。其对热稳定,56℃30分钟仍可存活。
病理学特征:
人细小病毒B19对人红系细胞有特别嗜性,此病毒可在新鲜人类骨髓细胞、外周血细胞、胎儿肝细胞、红白血病细胞、脐血细胞内生长,但在任何一个培养系统,其繁殖均有赖于红细胞及特异的促红细胞素的存在,细胞敏感性随红细胞分化而增强。利用上述系统可研究该病毒的特性,但不能用作标本分离。B19病毒对宿主细胞有直接细胞毒作用,可引起前红细胞超微结构的改变,包括特征性的染色质偏移、伪足形成、空泡等,壳蛋白颗粒存在于已凋亡的细胞核质空隙中。最近B19病毒的受体被确定是红细胞糖苷脂或红细胞P抗原,它们对病毒有高度亲和力,P抗原表达在巨核细胞、内皮细胞、胎肝细胞中也存在,有些个体缺乏P抗原,因而对B19病毒感染不敏感。
人细小病毒B19感染也是先天性心脏病的重要病因之一。B19病毒对胎儿心肌细胞有亲嗜性,胎儿发生B19病毒感染可致心肌肿胀变性。对先心病活检心肌组织及尸检心肌组织的B19病毒检测及原位定位研究,结果揭示B19病毒在先心病心肌细胞中有较高的阳性检测率,病毒DNA定位于心肌细胞核内,心肌细胞本身无炎症反应,这预示B19病毒可能是先心病的病因之一。