【隐孢子虫抗原elisa的检测原理】
在第一次温育的过程中。样本粪便中的隐孢子虫特异性抗原被微孔板中的单克隆抗体捕获,经洗涤后加入酶联物,然后洗去未结合的酶联物,随后加入底物液并与酶联物形成蓝色的复合物。最后加入终止液,溶液变黄。如果没有抗原被捕获或抗原水平不足,将不会有颜色反应发生。
【隐孢子虫抗原elisa样本采集要求】
未经任何处理的样本:采集完成后需于2 °C - 8 °C保存并在24小时内检测。如无法在该时间内检测的需保存在≤-20 °C条件下,避免反复冻融。
未经任何处理过的样本遵循以下检测步骤:
1. 在样本稀释管中加入0.7mL的稀释液和0.1g的粪便样本(用涂药棒取样,大概是小豌豆大小的量),使用前充分混匀。
如果使用棉签取样,则棉签表面裹有薄薄的一层样本即可,将其放到稀释管中,并加入1mL的稀释液混尽可能的充分溶解。使用前充分混匀。
2. 对于水样的样本,则在样本稀释管中加入0.1mL的样本和0.7mL的稀释液。使用前充分混匀。
3. 将所需的微孔数固定在板架上。
4. 孔1加入100 μL的阴性质控,孔2 加入100 μL的阳性质控。
5. 每个样本孔中加入100 μL的已稀释好的样本。
6. 室温(15 °C - 25 °C)温育60分钟,然后弃去内容物,每孔加满洗涤液洗板5次,最后在吸水纸上除去多余的液体。洗板过程中避免形成气泡,以免影响结果。
7. 每孔加入2滴酶联物。
8. 室温(15 °C - 25 °C)温育30分钟,然后弃去内容物,每孔加满洗涤液洗板5次,最后在吸水纸上除去多余的液体。洗板过程中避免形成气泡,以免影响结果。
9. 每孔加入2滴底物液。
10. 室温(15 °C - 25 °C)温育10分钟。
11. 每孔加入2滴终止液,轻轻震板15秒混匀。
12. 加入终止液后5分钟内读取结果。结果可以目测读取或用酶标仪读数
【隐孢子虫抗原elisa质量控制】
每次实验必须含有阴性质控和阳性质控。使用质控品可以使试剂盒的稳定性得到验证。