【贮存及稳定】
未开封试剂可在2-8℃下保存至有效期,不要使用过期试剂。开封试剂,微孔板保存在2-8℃,剩余板条放回密封袋内密封保存。
若按以上要求保存适当,开封试剂盒可保持活性4周。
【样本的采集与准备】
此实验将用到血清或EDTA血浆,请不要使用易溶血、黄疸血和脂血样品
注意:含叠氮钠的样品不可用于此实验。
样品储存
实验开始前应用盖子将样品密封好,2-8℃下可存放24小时。如果将样品冻存于-20℃的环境下则可将其存放更长时间。解冻的样本在实验之前必须要上下倒置几次。
样品的稀释
在第一次实验中,hCG浓度高于最高标准品的样品应当在实验前用零缓冲液进行稀释。在计算浓度时,应当把此稀释因子考虑进去。例子:
a) 按1:10稀释: 10μL的血清 + 90μL的零缓冲液(充分混合)。
b) 按1:100稀释: 10μL稀释好的a)+ 90μL的零缓冲液(充分混合)。
【检测方法】
实验开始前,所有的试剂都必须平衡至室温。
标准品
用1.0ml蒸馏水配制每支冻干的标准品,至少静置10分钟,使用前混合几次。重新制备好的标准品可在2-8℃的环境下稳定存放30天,更长时间可冻存于-20℃。
质控品
用1.0ml蒸馏水重新配制每支冻干的标准品,至少静置10分钟,使用前混合几次。重新制备好的标准品可在2-8℃的环境下稳定存放30天,更长时间可冻存于-20℃。
洗涤液
在30ml的浓缩洗涤液中加入1170ml去离子水来稀释洗涤液,最终工作洗涤液1200ml,稀释好的洗涤液可在室温下稳定存放2周。
检测步骤
每次检测都必须有一条标准曲线。
1) 将所需数量的板条固定到板架上。
2) 将标准品、样品和质控品分别50μL加入到相应的微孔中。
3) 在每一微孔中加入100μL零缓冲液。充分混匀30秒,在这个步骤完全混匀很重要。
4) 37℃孵育30分钟。
5) 快速弃取孔内反应物。用稀释好的洗涤液洗板5次(每孔400μL),吸水纸上拍干以除去残余液体。注意:洗板步骤是否正确会明显影响实验的灵敏度和精密度。
6) 在每一微孔中加入150μL酶联物。
7) 37℃孵育30分钟。
8) 快速弃取孔内反应物。用稀释好的洗涤液洗板5次(每孔400μL),吸水纸上拍干以除去残余液体。
9) 在每一微孔中加入100μL底物液。
10) 室温孵育20min。
11) 在每一微孔中加入100μL终止液。确保所有溶液颜色都由蓝色变成黄色。
12) 加终止液后15分钟之内450±10nm处测定OD值。
【结果计算】
1)计算每个标准品、质控品和病人样本的平均吸光度值。
2)用吸光度值作为纵坐标(y),浓度值作为横坐标(x),以每个标准品的吸光度值对其相应的浓度值进行标绘,作一条标准曲线。
3) 用每一样品的平均吸光度值在标准曲线上确定其相应的浓度。
4) 自动计算方法:说明书上给出的结果是用四参数自动计算得到的曲线。四参数是首选方法,其它的归纳方法可能会得出稍微不同的结果。
5)样品的浓度可直接从标准曲线上读取。样品中游离βHCG浓度高于最高标准品的必须用进行进一步的稀释。在计算样品浓度时应当把此稀释因子考虑进去。
【期望值】
建议每个实验室都确立自己的正常值和不正常值范围。
实验结果并不是确定治疗结果唯一原因,它还与临床观察和诊断测试有关。